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分子生物学检测方法生化鉴定

大肠检测方法

生化鉴定

生化鉴定常用三糖铁琼脂(TSIA)和KIA/MIU(AA -/ -)和IMVC( --)来初步鉴定。
Z后鉴定依据全方面生化反应,典型的大肠埃希菌的基本生化反应特征:TSIA(双糖铁)产酸/产气,产气、CIT(枸橼酸盐)阴性、URE(脲酶)阴性、IDN阳性、MOT(动力) /-、ORN(鸟氨酸) /-。

分子生物学检测

致泻性大肠是Z早应用分子诊断法的一类致病菌。
事实上,分子生物学方法是粪便菌群中致泻性大肠不同类型间相互间区分以及它们与非致病性大肠之间相区分的Z普遍、可靠的技术。
目前对致泻性大肠的分子生物学检测研究,在核酸探针技术和PCR法两个方面已经获得了重大进展。


水中粪大肠菌群快速检测标准方法

目前,大肠菌群检测方法发展很快,已提高到分子生物学水平,使检测更快速、准确。
酶底物法以其操作简便、检测周期短,将取代多管发酵法、滤膜法等传统方法,尤其是酶底物法采用密封培养技术,在检测医院污水时可以减少人员接触而降低检测人员的致病风险,因此具有更强的实用价值和应用价值,正是目前水中粪大肠菌群的快速检测标准方法之一。


平板计数法

  大肠平板计数法检测分为两个阶段。
在初培养中,选取2~3 个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿,每皿接种1mL。
同时取1mL生理盐水加入另外的无菌平皿作阴性对照。
迅速将 15mL~20mL冷却至 46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)加入每个平皿中。
小心地旋转平皿,定量盘,使培养基与样液充分混匀,等到琼脂凝固以后,再加入3mL~4mLVRBA 覆盖平板表层。
翻转平板铺匀后,放在 36(℃±1)℃培养18~24h。
平板菌落数按照以下方法选择:选取菌落数在 15CFU~150CFU之间的平板,定量盘报价,分别计数平板上出现的典型和的大肠菌群菌落。
典型菌落呈现紫红色,定量盘价格,并且菌落周围有红色的胆盐沉淀环,菌落直径为 不小于0.5mm。
证实试验为:从VRBA平板上挑取10 个不同类型的典型和菌落,分别移种到BGLB肉汤管内,(36℃±1)℃培养24~48h,观察产气情况。
凡是BGLB肉汤管产气,就可以报告是大肠菌群阳性。
证实是大肠菌群阳性的试管比例乘以以上步骤中计数的平板菌落数总数,再乘以稀释倍数,就是每g(mL)样品中大肠菌群数。

  大肠菌群平板计数法操作起来比较简便,带有菌落的平板可以直接计数,还可以观察菌落特征,可见的菌落与大肠菌群量可以直接对应,便于得出定量结果,定量盘供应商,这种方法的缺点是因为大肠菌群在平板上很小,所以肉眼有时难以观察,需要用放大镜仔细辨认。
验证实验需要挑选菌落,因此受人主观的影响很大,如果没有挑对或挑取的数量不够多都可能导致假阴性结果[3]。


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