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发布时间: 2022-10-20 19:13
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大肠菌群平板计数法检测

平板计数法

  大肠平板计数法检测分为两个阶段。
在初培养中,选取2~3 个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿,每皿接种1mL。
同时取1mL生理盐水加入另外的无菌平皿作阴性对照。
迅速将 15mL~20mL冷却至 46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)加入每个平皿中。
小心地旋转平皿,使培养基与样液充分混匀,等到琼脂凝固以后,再加入3mL~4mLVRBA 覆盖平板表层。
翻转平板铺匀后,放在 36(℃±1)℃培养18~24h。
平板菌落数按照以下方法选择:选取菌落数在 15CFU~150CFU之间的平板,分别计数平板上出现的典型和的大肠菌群菌落。
典型菌落呈现紫红色,并且菌落周围有红色的胆盐沉淀环,菌落直径为 不小于0.5mm。
证实试验为:从VRBA平板上挑取10 个不同类型的典型和菌落,分别移种到BGLB肉汤管内,成都检测试剂,(36℃±1)℃培养24~48h,观察产气情况。
凡是BGLB肉汤管产气,就可以报告是大肠菌群阳性。
证实是大肠菌群阳性的试管比例乘以以上步骤中计数的平板菌落数总数,再乘以稀释倍数,就是每g(mL)样品中大肠菌群数。

  大肠菌群平板计数法操作起来比较简便,带有菌落的平板可以直接计数,还可以观察菌落特征,可见的菌落与大肠菌群量可以直接对应,便于得出定量结果,这种方法的缺点是因为大肠菌群在平板上很小,所以肉眼有时难以观察,需要用放大镜仔细辨认。
验证实验需要挑选菌落,因此受人主观的影响很大,如果没有挑对或挑取的数量不够多都可能导致假阴性结果[3]。


食品企业常检测的项目就是两种卫生指示菌:菌落总数和大肠菌群

众所周知,食品企业常检测的项目就是两种卫生指示菌:菌落总数和大肠菌群。
菌落总数的检测不必多说,因为现行的就只有GB 4789.2-2010,总大肠检测试剂,不会存在太大的问题。
而大肠菌群的检测问题就多了,关注焦点在于MPN法的检测结果报告,大肠检测试剂,细心地朋友可能会发现,报告单位有时是MPN/g(mL),有时又是MPN/100g(mL),这两个单位是什么意思呢?能够简简单单的认为两者相差100倍吗?当然是否定的。


水中粪大肠菌群含量的高低就可以直接反映水体粪便污染程度,进而指示肠道致病菌污染危害人体健康的风险。
肠道致病菌主要包括沙门氏菌、志贺氏菌和致病性大肠埃希氏菌等,能够引起各种急慢性肠道gan染、食物中du、腹泻发烧等,还可引起泌niao道、呼吸道、伤口和中shu系统疾病。
由于在自然界中易,粪大肠菌群的存在可以反映比较近期的粪便污染。

粪大肠菌群传统的检验方法为滤膜法和多管发酵法。
二者均需要有基础、操作熟练的实验人员在洁净无菌实验室进行操作,且操作较繁琐。
其中滤膜法检测时间为2-3天,多管发酵法检测时间为3-5天,大肠菌群检测试剂,检测周期长。

多管发酵法易染菌,数据重现性差;滤膜法在检测浑浊度高、非大肠类细菌密度大的水样时,准确性较差。


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